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用于IHC.的冷冻与福尔马林固定的石蜡嵌入式组织切片

您是否考虑向您的临床前毒理学研究设计添加免疫组织化学(IHC)? IHC.整合分子病理学和传统的组织病理学以允许测试化合物或细胞靶标的可视化 原位。

IHC适用于各种研究需求,包括:目标验证,免疫咽部,测定肿瘤中的微血管密度或其他病变,鉴定和跟踪动物模型中的人干细胞,以及用于证明细胞增殖增加的致癌性研究,鉴定分化的肿瘤并揭示测试物文章相关肿瘤的分子鉴定。可以使用数字成像软件量化IHC.结果。

在规划IHC时制作的第一个决定之一是组织固定方法。这是IHC.应用,冷冻组织或福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织的最佳原料?虽然在过去二十年中,在抗原检索技术的发展中具有改善的抗体 - 抗原结合和检测,但一些抗原(包括某些白细胞表面标志物)不能存活福尔马林固定和石蜡嵌入,并且必须在冷冻切片中进行评估。  

IHC.的冷冻组织加工涉及快速冻结新鲜组织,将其嵌入特异性培养基(如OCT)中,并用低温恒温器切断,通常用丙酮或乙醇进行短固定。冷冻组织切片的优点包括保留抗原的天然蛋白质结构和避免使用福尔马林的使用,这是一种有毒和致癌化合物。缺点包括由于冻结伪影和低温恒温器产生的部分,劳动和材料要求的厚度增加了组织形态的损失,当时冻结组织收集加入尸检,冷藏后勤,以及等内那的使用,这是一个有害物质。

当FFPE组织用于IHC时,10%中性缓冲福尔马林(NBF)的标准组织学固定剂足够。石蜡嵌入前的固定时间通常限于24-48小时,这大大有助于保存抗原完整性。 FFPE部分IHC.的优点包括出色的组织形态和易于掺入常规组织收集,加工和储存的内容。主要缺点是蛋白质的交联,其通常可以用简短的热,化学或基于酶的抗原检索步骤逆转。

已经证明的商业上可获得的抗体的数量与皇冠体育平台中使用的物种的FFPE组织反应正在迅速扩张。 FFPE组织用于IHC.提供最佳组织形态,这有助于鉴定组织和细胞内的靶抗原位置。随着常规组织处理的易于整合,这些优点是有效的FFPE组织的选择,用于在该方法中不排除抗原抗体结合的应用。

理想情况下,您应该在组织收集前计划IHC.,以建立适当的固定选择和时序。确定您想要在哪种组织中进行可视化的目标,以及研究可用抗体的组织,以及审查用所选抗体成功使用的固定方法。当在冻结和FFPE组织中成功使用抗体时,我们推荐FFPE方法。

并记住,无论使用哪种固定技术,必须在死亡后收集并迅速地收集或冻结的组织,以急于破坏感兴趣的抗原的抗原破坏。您的组织质量越好,结果清晰!

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